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美國
尼古拉斯·加利齐纳 / 卡米拉·门德斯 / 杰瑞德·莱托 / 伊德瑞斯·艾尔巴
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美國
玛雅·凯洛哈 / 克里斯·桑德斯 / 西德尼·阿古顿 / 比利·马格努森
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美國
米莉·阿尔柯克 / 伊芙·雷德利 / 杰森·莫玛 / 马提亚斯·修奈尔
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美國
汤姆·汉克斯 / 蒂姆·艾伦 / 琼·库萨克 / 格蕾塔·李
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美國 / 紐西蘭 / 加拿大 / 匈牙利
凯瑟琳·拉加艾亚 / 道恩·强森 / 约翰·图伊 / 弗兰基·亚当斯
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美國
皮埃尔·柯芬 / 特雷·帕克 / 克里斯托弗·瓦尔兹 / 艾莉森·珍妮
地球-65，蜘蛛女格溫（海莉·斯坦菲爾德 Hailee Steinfeld 配音）因爲好友彼特之死而充滿愧疚，而父親對蜘蛛俠的誤解也讓她倍感焦慮。某次行動中，格溫結識了來自其他宇宙的同伴米圭爾·奧哈拉和傑西卡·德魯。從他們口中得知，爲了防止多元宇宙進一步崩壞，米圭爾策劃成立了由蜘蛛俠中的精英組成的突擊隊。格溫受邀加入他們，並利用時空穿梭的機會來到了地球-1610，見到久違的邁爾斯（沙梅克·摩爾 Shameik Moore 配音）。此時的邁爾斯和父母關係緊張，他憧憬格溫，渴望加入突擊隊又遭到拒絕。 隨後邁爾斯又聽到一個可怕的消息，每一個宇宙中，失去至親正是所有蜘蛛俠的可悲宿命……